酶標儀的自檢標準
1.外觀酶標儀上應有儀器名稱,型號,編號,生產(chǎn)廠家,出廠日期和電源電壓;各調(diào)節(jié)旋鈕,按鍵和開關均能正常工作,外表面無明顯機械損傷;顯示文字應清楚完整。
2.酶標儀的穩(wěn)定性(漂移)選用492nm波長,在吸光度0.0A處,測定標稱值為1.0A的光譜中性濾光片(測定操作按儀器說明進行),記錄儀器示值或均值,10min后再次記錄儀器示值或均值,前后兩次測定值之差不應超過±0.005A。
3.吸光度測定的準確度選用405,492和620 nm波長,以空氣為參比,分別測定標稱值為0.5和1.0A的光譜中性玻璃濾光片,用測試板代替酶標板,按儀器說明連續(xù)測定3次,按下式計算準確度:AA=1/3(A、+A。+A3)—A:(A:為標準值)。
酶標儀使用時的注意事項
1、電源檢查。通電前檢查電源線是否完整無缺,然后將自動酶標儀外接于交流電源(220V±33V,50Hz±1Hz)上,打開儀器后面的源開關,檢查電源指示燈是否亮。若發(fā)現(xiàn)自動酶標儀有煙霧、異味或奇怪的聲音發(fā)出,立即關閉電源,并與經(jīng)銷商聯(lián)系。
2、自檢。打開電源開關,等待約10s,系統(tǒng)進入初始化流程,要完成以下工作:①系統(tǒng)程序加載;②讀取用戶數(shù)據(jù);③等待光源穩(wěn)定(需等待2~3min);④光路、機械自檢(期間濾光片輪會轉動,酶標板往返走板一次)。若系統(tǒng)檢測正常,屏幕會顯示主界面的6種主要功能模塊,包括系統(tǒng)管理、項目設置、樣本檢測、患者信息、數(shù)據(jù)查詢、綜合報告。使用者可以根據(jù)需要進行具體功能操作。若初始化過程中有錯誤發(fā)生,系統(tǒng)會彈出窗口報告錯誤信息,應進行檢查。
6、觸摸屏校準。自動酶標儀經(jīng)過一段時期使用之后,觸摸屏可能會出現(xiàn)偏移現(xiàn)象,這就需要定期檢查,通過觸摸屏校準功能鍵做微量調(diào)整。
7、清潔。為了使自動酶標儀保持一個良好的工作狀態(tài),必須做好日常的清潔工作。
酶標儀的分類
光吸收酶標儀:是用來進行可見光與紫外光吸光度的檢測,特定波長的光通過微孔板中的樣品后,光能量被吸收,而被吸收的光能量與樣品的濃度呈一定的比例關系,由此可以用來定性和定量的檢測,光吸收的檢測技術成熟,成本低,操作簡單,但是動態(tài)范圍窄,靈敏度比較低,特異性不強,一般可見光和紫外光分別采用鎢燈作為光源,而紫外/可見酶標儀是可以將兩種光源進行切換,適應不同測量波長的需求。
熒光酶標儀:是用來進行熒光的檢測,通過激發(fā)光柵分光后的特定波長的光照射到被熒光物質(zhì)標定的樣品上后,會發(fā)出波長更長的發(fā)射光,通過發(fā)射光柵后到達檢測器,熒光的強度與樣品的濃度呈一定的比例,熒光檢測靈敏度高,可實時檢測,使用方便,檢測模式多樣,但是容易受外界干擾,激發(fā)光與發(fā)射光容易互相影響,干擾檢測。
如何使用酶標儀測吸光度
1.將實驗待測樣品分裝到多孔板上。96孔板推薦每孔100ul -200ul體積,384孔板推薦每孔50ul-80ul體積為宜。如因實驗需要,同一塊多孔板上不同孔的樣品體積無法保持一致,需選用帶光程矯正功能的酶標儀,將光程矯正到統(tǒng)一的數(shù)值,例如Molecular Devices品牌的酶標儀。
2.打開儀器 的微孔板艙門,將多孔板放置入儀器內(nèi)并關上艙門。
3.打開儀器軟件,在實驗參數(shù)設置界面選擇ABS功能。根據(jù)實驗目的可選擇不同的檢測模式(Reader Type),包括終點法(Endpoint)、動力學法(Kinetic)、孔域掃描(Well Scan)和光譜掃描(Spectrum)。
4.設置波長,版型,然后讀板,得到數(shù)據(jù)。